1. Объект исследования: БМБ-II-"Ламинар-С"-1,2(221.120)
2. Дата исследований: 15.08.2016-09.09.2016
3. Место проведения: Испытательная лаборатория отдела аналитики и валидации ЗАО «Ламинарные системы».
4. Цель: оценка эффективности процедуры деконтаминации скрытых полостей бокса микробиологической безопасности с помощью биологических индикаторов.
5. Используемое оборудование и приборы:
- Распылитель аммиака формалина LS 5.01.003.02
- Индикатор биологический одноразового применения (БИКСт-Пл/01-«Медтест»)
- Инкубатор лабораторный микробиологический ИЛМ-170-01
6. Порядок проведения исследования:
При проведении работ, связанных с доступом в потенциально контаминированную часть боксов микробиологической безопасности, требуется проведение процедуры деконтаминации (обеззараживания) скрытых полостей бокса. ГОСТ РЕ Н 12469-2010 регламентирует в качестве такой процедуры фумигацию 36% формалина с последующей выдержкой не менее 8 часов.
Исследования эффективности данной методики проводились путем исследования влияния данного метода деконтаминации на биологические индикаторы, размещённые внутри бокса.
6.1 Биоиндикаторы
Для оценки эффективности воздействия паров формальдегида на микроорганизмы использовались биологические индикаторы одноразового применения БИКСт-Пл/01-«Медтест», ЗАО «Медтест», г. С.-Петербург. Продукция соответствует требованиям ГОСТ ISO 11138-1, ТУ 9398-012-53262326-2011.
Наименование тест-микроорганизма, штамм: Bacillus Stearothermophilus ВКМ В-718.
Номинальная популяция на носителе: 5•105 - 5•106.
6.2 Размещение биоиндикаторов
Индикаторы располагались в характерных точках процесса: внутри рабочей камеры бокса (2 шт на разной высоте), под столешницей (1 шт). В качестве критической точки принималось пространство с наружной стороны выпускного фильтра как наиболее труднодоступное для проникновения паров формальдегида. В данной зоне располагались 3 индикатора (см. рис. 1). В качестве положительного контроля роста индикатора использовался случайный индикатор из упаковки, который не подвергался воздействию формальдегида.
Рис 1. Местоположение исследуемых проб в рабочей камере: а, б, в – внутри рабочей камеры бокса; г, д – после выпускного фильтра.
6.3 Химические агенты
Согласно требованиям ГОСТ Р ЕН 12469-2010, Приложения J, на каждый кубический метр объема бокса должно испаряться 60 мл формалина. Для случая герметизации бокса с помощью специальной технической заглушки, внутренний объем бокса составляет 1 м3. Для надежности количество испаряющегося формалина было увеличено до концентрации 80 мл/м3. Таким образом, распылялось формалина (CH2O, 36 % водный раствор) - 80 мл, воды – 40 мл.
6.4 Порядок проведения деконтаминации
Для деконтаминации бокс герметизировался с помощью специального комплекта технологических заглушек производства ЗАО «Ламинарные Системы». Внутрь рабочей камеры бокса помещался испаритель формалина, в который предварительно заливались агенты из п. 6.3. После герметизации начинался процесс испарения формалина. В процессе испарения (20-30 мин) вентилятор бокса был включен для того, чтобы пары формалина проникли во все скрытые полости бокса. После окончания испарения формалина вентилятор отключался и начинался отсчет времени экспозиции, которое составляло 17 ч. После экспозиции остаточные пары формальдегида выветривались из бокса с помощью вытяжной системы вентиляции. Для достижения статистически достоверного результата исследования, деконтаминация и анализ биоиндикаторов проводились последовательно три раза.
6.5 Порядок инкубации биоиндикаторов и анализ результатов
После окончания деконтаминации биоиндикаторы снимались с мест установки. Согласно РЭ индикаторов ампула с питательной средой внутри индикатора разбивалась, и индикаторы помещались в инкубатор. Инкубирование проходило при температуре 55 °С в течение 24 часов.
После инкубирования производился визуальный осмотр биоиндикаторов. Изменение цвета индикатора с фиолетового на желтый свидетельствовало о прорастании тестовой культуры и, следовательно, недостаточной эффективности процесса деконтаминации. Результаты исследований приведены в Таблице 1 и рис. 2
Рис. 2. Биоиндикаторы после инкубации (справа - положительный контроль-«К»).
7. Заключение
После проведения процедуры деконтаминации бокса микробиологической безопасности рост биологических индикаторов не наблюдается, что свидетельствует об эффективности процедуры деконтаминации с использованием формальдегида. Тем не менее, внутренние поверхности бокса, а так же НЕРА фильтры, следует считать безопасными для обращения с учётом применения средств индивидуальной защиты.
